私たちが培養した細胞は、

細胞工場汚染されており、そのほとんどは取り扱いが困難です。汚染された細胞が貴重で再入手が困難な場合は、以下の方法で細胞を除去できます。

1. 抗生物質を使用する

抗生物質は細菌を殺すのにより効果的です細胞工場。併用薬は単独薬よりも効果的です。予防的な投薬は、汚染後の投薬よりも効果的です。予防薬では通常、二種類の抗生物質（ペニシリン 100u/mL とストレプトマイシン 100μg/mL）を使用します。汚れが付着した後は通常の5～10倍の洗浄方法が必要です。薬は添加後24〜48時間使用し、その後通常のルーチンに置き換える必要があります。培養液。この方法は、汚染の初期段階では効果的である可能性があります。ペニシリンとストレプトマイシンに加えて、使用される抗生物質にはゲンタマイシン、カナマイシン、ポリミキシン、テトラサイクリン、ナイスタチンなども含まれます。一般的に使用されるのは、400 ～ 800 μg/mL のカナマイシンまたは 200 μg/mL のテトラサイクリンです。培地は2〜3日ごとに交換し、1〜2世代受け継いで処理します。近年、4-フルオロ、2-ヒドロキシキノリン（シプロフロキサシン、Cip）、プルーロムチリン誘導体（プルーロムチリン誘導体、BM-Cyclin2：BM-1およびテトラサイクリン誘導体（BM-2））の抗生物質が使用されることが報告されています。単独または組み合わせて使用​​すると、マイコプラズマを殺すのに効果的です。これら 3 つの抗生物質はすべて、PBS で 250 倍に濃縮された溶液に調製され、後で使用するために -20°C で保存されます。使用濃度はCipが10μg/mL、BM-1が10μg/mL、BM-2が5μg/mLです。使用する場合は、まず汚染培地を吸引し、BM-1を含むRPMI1640培地を添加し、3日後に培地を吸引し、BM-2を含むRPMI1640培地を添加して4日間培養、というように3日間連続で行います。 。33258 蛍光染色顕微鏡によりマイコプラズマが除去されたことが証明されるまで、通常の培地を加えて培養し、3 ～ 4 回継代します。

2. 加熱処理

汚染された組織培養物を 41°C で 18 時間インキュベートするとマイコプラズマを死滅させることができますが、細胞に悪影響を及ぼします。したがって、マイコプラズマを最大限に死滅させ、細胞への影響を最小限に抑えることができる加熱時間を調査するために、治療前に予備試験を実施する必要があります。この方法は信頼できない場合があります。最初に薬剤で治療し、その後41℃で加熱すると効果がより良くなります。

3. マイコプラズマ特異的血清を使用する

マイコプラズマ汚染は、5% ウサギ マイコプラズマ免疫血清 (血球凝集力価 1:320 以上) で除去できます。特異的抗体はマイコプラズマの増殖を阻害できるため、抗血清処理の 11 日後には陰性になり、5 か月後も陰性を維持します。はマイナスです。ただし、この方法は、抗生物質を使用する場合よりも面倒であり、便利でも経済的でもありません。

4. その他の方法

汚染を除去する方法としては、上記以外にも動物への接種・滅菌法、マクロファージ貪食法、汚染物質にブロモウラシルを添加する方法などがあります。カルチャーボトル光を照射したり濾過したりする方法もありますが、どれも面倒で効果がありません。したがって、マイコプラズマ汚染が発生すると、特に重要な価値がない限り、通常は廃棄され、再培養されます。

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